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DIATA-72 DOTA-72 monodispersado DOTA-PEG tiene una baja absorción de riñón y altas relaciones tumor-sangre, lo que resulta en una mascota mejorada de 64CU

Número Navegar:0     Autor:Lin Li, Fabio Turatti, Desiree Crow, James R. Bading, Anne-Line Anderson, Erasmus Poku, Paul J. Yazaki, Lawrence E. Williams, Debra Tamvakis, Paul Sanders, David Leong, Andrew Raubitschek, Peter J. Hu     publicar Tiempo: 2022-04-28      Origen:Journal of Nuclear Medicine July 2010, 51 (7) 1139-1146

DIATA-72 DOTA-72 monodispersado DOTA-PEG tiene una baja absorción de riñón y altas relaciones tumor-sangre, lo que resulta en una mascota mejorada de 64CU

Las diabinas son dímeros no covalentes de fragmentos de anticuerpos de cadena única que retienen la avidez de la IgG intacta pero tienen un aclaramiento sanguíneo más favorable que la IgG intacta. Los radiometales ofrecen una amplia gama de vidas medias y emisiones para los requisitos de imágenes y terapia coincidentes y proporcionan un etiquetado fácil de los conjugados de anticuerpos quelato. Sin embargo, debido a su alta retención y metabolismo en el riñón, el uso de diabodies marcados con radiometal puede ser problemático tanto para la imagen como para la terapia. Métodos: habiendo demostrado previamente que el antígeno 111in-dota-polietilenglicol (PEG) 3400-anti-carcinoembrionónico diáfolla de diámbano tiene menos de la mitad de la absorción de riñón y la retención de diámetro no pegilado y que los dos tienen una absorción y retención de tumores similares, sintetizamos, sintetizamos, sintetizamos Un derivado similar para una glucoproteína 72 diacopoproteína 72 diamante. También redujo el tamaño molecular del PEG3400 polidispersado a PEG27 y PEG12 monodispersados ​​(masas nominales de 1.321 y 617, respectivamente). Realizamos biodistribuciones de sus conjugados DOTA radiolabelados con 125i, 111 pulgadas o 64CU en ratones atímicos con tumores. Resultados: La adición de PEG3400 al Diabody redujo la absorción de riñón a un nivel (≈10 porcentaje de dosis inyectada/g) comparable a la obtenida con IgG intacta marcada con radiometal. Los conjugados PEG27 y PEG12 Diabody también demostraron una baja absorción de riñón sin reducción de la absorción del tumor o las relaciones tumorales a sangre. Cuando se radiolabeló con 64CU, los conjugados DOTA-PEG12 y -PEG27 Diabody dieron imágenes PET de alto contraste de xenoinjertos de cáncer de colon en ratones atímicos. Conclusión: las diabinas PEGiladas pueden ser una plataforma valiosa para la entrega de radionucleidos y otros agentes a los tumores.

Para ser agentes de imágenes tumorales efectivas, los anticuerpos radiomarcados dirigidos deben proporcionar tanto altas relaciones tumorales y altas tumores a sangre (1,2). En un extremo, los anticuerpos monoclonales (150 kDa) tienen un aclaramiento de sangre relativamente lento (vida media β [T1/2β], 48-72 h), lo que permite un tiempo suficiente para la acumulación en el tumor, pero sufre de bajo tumor a -Catios de sangre. En el otro extremo, los fragmentos recombinantes de FV de una sola cadena (SCFV) (25 kDa) se eliminan rápidamente de la sangre (T1/2β, 0.5–2.0 h), lo que resulta en altas relaciones tumor a sangre pero baja acumulación general de radioactividad de la radioactividad en tumor (3). Después de analizar una serie de fragmentos de anticuerpos recombinantes radiodinados (4), nosotros y otros concluyeron que el logro simultáneo de una alta absorción de tumores y alta relación tumor-sangre requiere un anticuerpo bivalente de tamaño 50–80 kD (1,3,4), con diabodos (dímeros no covalentes del tamaño 55 kDa) como una plataforma que cumple estos criterios. Por ejemplo, los diabódicos marcados con 124i se han desempeñado bien en un modelo preclínico de PET (5). Sin embargo, un inconveniente de los anticuerpos radioodinados es que pueden metabolizarse rápidamente en los tejidos, incluido el tumor, especialmente si el antígeno sufre internalización en la unión de anticuerpos. Los fragmentos de anticuerpos recombinantes marcados con radiometal ofrecen una mejora significativa en la relación tumor-sangre, pero esto se compensa con una alta retención renal. Por lo tanto, la excreción sistémica de los metabolitos radiometales es lenta, en comparación con los productos metabólicos de radioyodo. Hemos identificado 111 pulgadas-dota-lisina como producto de punto final metabólico en el riñón para fragmentos de anticuerpos antigrinoembrionón (CEA) de 111 pulgadas (CEA) (6).

Nosotros y otros hemos tratado de mejorar la utilidad oF fragmentos de anticuerpos recombinantes marcados con radiometal disminuyendo la absorción o retención de riñón. En un enfoque, la absorción del riñón está parcialmente bloqueada por la administración de L o D-lisina intravenosa (7,8). Alternativamente, hemos diseñado enlazadores metabolizables únicos entre el anticuerpo y DOTA que han disminuido la retención renal de hasta 4 veces en comparación con los conjugados n-hidroxi succinimida (NHS) -dota (9). Un tercer enfoque es disminuir la retención renal de los fragmentos de anticuerpos al aumentar su peso molecular aparente mediante la unión de polietilenglicol (PEG) (10). Este enfoque se aplicó con éxito al fragmento anti-Cea F (ab ') A5B7 mediante la conjugación con MPEG6000, lo que aumentó la retención tumoral y la vida media sérica en 6 y 5 veces, respectivamente ((11). En el caso de antimucina SCFV CC49/218 conjugado con PEG5000, se observó un aumento de 14 veces en la vida media sérica (12). En ese estudio, los autores concluyeron que se observaron mayores mejoras con el aumento del tamaño de los polímeros PEG en lugar de la cantidad total de PEG, lo que a menudo condujo a una disminución de la inmunorreactividad del conjugado. En otro estudio, los investigadores diseñaron un SCFV-Tiol dimérico anti-mucina-1 (55 kDa) con residuos de cisteína C-terminal para la conjugación específica del sitio con PEG de maleimida de diferentes tamaños (13). Llegaron a la conclusión de que los rendimientos de la conjugación necesitaban mejoras antes de la aplicación clínica. Curiosamente, un informe reciente (14) evaluó una PEG de cadena ramificada de 40 kDa conjugada con un diálogo biespecífico que se unió covalentemente a CEA y CD3 y mostró que la captación del tumor duplicó el tumor y el mayor tiempo de circulación (T1/2β, 50 h). A lo largo de la misma línea de investigación, Leong et al. (15) Utilizó el grupo de tiol natural de un fragmento fabuloso de ingeniería a IL-8 para la conjugación con PEG de malimida de diferentes tamaños. Descubrieron que la conjugación con la PEG 10 kDa de Maleimida dio como resultado un tamaño molecular aparente de 180 kDa, comparable al tamaño de un anticuerpo intacto. Es importante destacar que los estudios de eliminación de sangre revelaron un T1/2β de 44 h, en comparación con 3 h para la fabulosa Fab 'no modificada. Además, Yang et al. (10) clavijas de maleimida conjugada de diferentes tamaños a un factor de necrosis anti-tumoral α SCFV (la mitad del tamaño de un diablo) con una cisteína diseñada en la región de enlazador o terminal C. Descubrieron que la conjugación con la PEG de Maleimida (20 kDa) daba una vida media de espacio de sangre similar a la de IgG intacta, pero no ofreció conclusión sobre el efecto de la modificación de PEG en la retención renal.

Recientemente, hemos demostrado que agregar PEG3400 a111Diabandis reducida en el doTa-cea redujo la absorción de riñón a 24 a 48 h de más de 200 porcentaje de dosis inyectada ( %ID)/g para la diáfolla no pegilada a un 50 %de ID/g al tiempo que preserva una alta absorción de tumores (16). Sin embargo, se requiere una mayor reducción en la absorción de riñón. Para estudiar la dependencia de DiaBody de la conjugación DOTA-PEG3400, generamos y pegilamos una glucoproteína 72 (TAG-72) anti-tumor. con IgG intacta. Esto sugirió que la absorción del riñón es una función tanto del tamaño molecular aparente (como se modifica por PEG) como de otros factores menos definidos intrínsecos para el diáfolio (por ejemplo, la modificación del punto isoeléctrico [PI] influye17,18)).

Habiendo reducido la absorción de riñón para Diabody marcado con radiometal por conjugación con PEG3400, buscamos investigar más a fondo el enfoque mediante el uso de conjugados DOTA-PEG monodispersados. Sintetizamos DOTA-PEG27-CYS-VS y DOTA-PEG12-CYS-VS, donde Cys-VS es vinil sulfona conjugada con el tiol de la cisteína, y conjugamos estas clavijas monodispersadas con grupos amino en el diáfol a pH 9.0, una reacción We We We We We We We We We We We tener previamente descrito (19). Los conjugados se caracterizaron por espectrometría de masas, enfoque isoeléctrico (IEF) y cromatografía de exclusión por tamaño. Biodistributiones de111Los conjugados en ratones atímicos que llevan los xenoinjertos de tumor de colon LS-174T dieron absorciones tumorales de 40–45 %de identificación/g, relaciones tumorales a sangre de 8–10 y una absorción de riñón de 10 %de ID/g a 24 h de 24 h . Además, mascota con64Los conjugados marcados con CU proporcionaron imágenes tumorales de alto contraste dentro de las 24 h posteriores a la inyección (relación tumor-sangre, 8: 1).


Materiales, radiolabels, espectrometría de masas

Las células LS-174T se obtuvieron de ATCC y se mantuvieron como se describió anteriormente (16). 1,4,7,10-tetraazacyclododecano-1,4,7-tris (t-Cetato de butilo) -10-ácido acético se obtuvo de Macrocyclics, Inc. NHS-PEG3400-VS (Catálogo no. 4M5B0F02) se adquirió de Nektar.N-Fluorenilmetiloxicarbonilo (FMOC) -Amido-DPEG27 se obtuvo de Novabiochem (EMD Biosciences), yN-Fmoc-Amido-DPEG12 El ácido se adquirió de Quanta BioDesign Ltd.111En cloruro era de Amersham,64CU de la Facultad de Medicina de la Universidad de Washington, y125Yo de Perkin Elmer. Los espectros de masas se registraron en un dispositivo de espectrometría de masas de cromatografía líquida de tiempo de tiempo cuadrupolo Agilent 6520.

Construcción, clonación, expresión y purificación de anti-TAG-72 Diabody

El diáfolio anti-TAG72 (AVP04-07) se basó en los dominios V del anticuerpo CC49 principal y los fragmentos derivados de SCFV. El gen tenía codones optimizados paraEscherichia coliexpresión con la orientación vH–VL(Donde VHy VLson los dominios variables de las cadenas pesadas y ligeras, respectivamente) unidas por una g4S enlazador e incluyó un C-terminal su6cola. AVP04-07 fue subclonado enE. coliBL21 (DE3) (F OMPT HSDSB(RBmB)Gal DCM(DE3)) (Novagen) y producido en un fermentador de 18 l. Lisado bacteriano borrado por centrifugación (16,000 ×g, 30 min) y la filtración a 0.45 μm se purificó utilizando un procedimiento de 3 pasos (HISTRAP, HITRAP SP HP y Superdex 75 Prep Cromatography; GE Healthcare) en un purificador AKTA 10 (GE Healthcare).

Ultracentrifugación analítica

Los experimentos de velocidad de sedimentación se realizaron utilizando una ultracentrífuga analítica Beckman Modelo XL-I a 20 ° C. Los datos se recopilaron en un290 nmEn modo continuo, utilizando un intervalo de tiempo de 300 sy un tamaño de paso de 0.003 cm, sin promediar. Densidad de solvente (1.00499 g/ml a 20 ° C), viscosidad del solvente (1.0214 CP) y un volumen específico parcial para AVP04-07 se calcularon utilizando el programa SEDNTERP. Los datos de velocidad de sedimentación se ajustaron a un modelo de distribución de tamaño continuo utilizando el programa SEDFIT (www.analyticalultracentrifugation.com).

Inmunorreactividad e IEF

La unión de AVP04-07 al antígeno TAG-72 se determinó usando mucina submaxilar bovina (Aldrich-Sigma) en un ensayo de cambio de columna (Superdex 200). La electroforesis en gel de IEF se ejecutó en un gel prefabricado de IEF (pH 3–10) (novex) o en un fastgel de farmacia de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Conjugación de AVP04-07

NHS-DOTA se conjugó con AVP04-07 DiaBody como se describió anteriormente (16). NHS-PEG3400-VS se conjugó con AVP04-07 DiaBody en una relación molar de 30: 1 y pH 6.0 como se describió anteriormente (19). El conjugado se reaccionó con cisteína amido-dota (20) en una relación molar de 50: 1.NORTE-El ácido FMOC-AMIDO-PEG27 se acopló a la resina Wang Cys-Polystyreno, escindida y purificada por cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa, reaccionó con un exceso de vinilo sulfona de vinilo y reaccionado por la cromatografía líquida de alta fase inversa en fase inversa. . DOTA-PEG27-CYS-VS se reaccionó con AVP04-07 DiaBody en una relación molar de 50: 1. La síntesis y la conjugación de DOTA-PEG12-CYS-VS a Diabody en relaciones molares de 20: 1 y 50: 1 se realizaron como se describió anteriormente.

Radiolabeling de AVP04-07 y sus conjugados

AVP04-07 y sus conjugados fueron radioodinados con125Yo (Perkin Elmer) usando el método de gen IODO (21). N / A125Se añadió I (5–10 μl, 26 MBQ) a 200 μg de AVP04-07 en un tubo precubido con 20 μg de Generación IODO (Pierce) y se incubó a temperatura ambiente durante 3 minutos. Los rendimientos de la radiomarcación fueron del 80%-100%. El etiquetado radiometal de DOTA-AVP04-07 se realizó usando111Incluido3(0.15 mbq/μg) o64Cucl2(0.37 mbq/μg) como se describió anteriormente (19). Los rendimientos de radiolabeling eran típicamente del 70%-90%. El material radiomarcado se purificó en columnas Superdex -75 o -200.

Modelo de xenoinjerto LS-174T

Mujer atímicanu/nuLos ratones (Charles River Laboratories), de 6 a 8 semanas de edad, fueron inyectados con células LS-174T (106) subcutáneamente en el flanco. Después de 10 días, los ratones se inyectaron por vía intravenosa con una mezcla (200 μl) de 370 kbq de125I etiquetado y 150 kbq de111AVP04-07 en el marcado (2–6 μg de proteína total) para estudios de biodistribución. Los ratones fueron sacrificados en varios puntos de tiempo: tumor, sangre y órganos principales fueron recolectados, pesados ​​y contados con corrección para el cruce de111En conteos en el125Yo canalizado. Las curvas de tiempo -actividad se corrigieron para la descomposición radiactiva y se presentaron como %ID/G.

MASCOTA

Los ratones con tumores se inyectaron por vía intravenosa con64Conjugados de diámbano o diámbano marcado con Cu y tomado con imágenes a 1, 4, 21–22 y 45–46 h con un escáner PET de animal pequeño (Modelo Micropet R4; Siemens/Ctimi). Los ratones anestesiados con isoflurano se escanearon durante 20 minutos a los puntos de tiempo de 1 y 4 h, 45 minutos a las 21–22 h, y 60 minutos a 45-46 h. Los datos se clasificaron en singramas bidimensionales utilizando el método de reembolso de Fourier y se corrigieron para la radiodecay intrascular, la no uniformidad del detector y el ruido de coincidencia aleatoria. Las imágenes fueron reconstruidas por el método de maximización de expectativa iterativa de subsets ordenados (4 iteraciones, 16 subconjuntos).

Comparación de las características de imagen entre Diabody y Derivados

Se aplicó una figura de mérito (IFOM) de imágenes a las imágenes planas y de PET (1,2,16). El ifom en el momentotDespués de la inyección se define como:Matemáticascon CV0Ser el coeficiente de variación de la diferencia en los recuentos de tumores y antecedentes (z), ε el factor de eficiencia del detector, λ la constante de descomposición,A0, la actividad inyectada total y el volumen del tumor. La absorción (%ID/g) se denotó comouT(tumor) yuB(Antecedentes), respectivamente. Al trazar esta función, establecemos el producto de CV0, ε,A0, y vol igual a la unidad. Las únicas fuentes de variación son la absorción del tumor, la absorción de tejido de fondo y la descomposición física. Tenga en cuenta que ifom (t) <0 implica que el tejido de fondo (sangre o riñón) tiene una mayor absorción que el tumor en el momentot.

Caracterización de AVP04-07 DiaBody

AVP04-07 Diabody expresado enE. coliy purificado por un método de 3 pasos se eluyó como una sola especie en la filtración de gel (Fig. Suplementaria 1A; los materiales suplementarios están disponibles en línea solo enhttp://jnm.snmjournals.org) como un dímero monodispersado con una masa molecular aparente de 52.5 kDa por ultracentrifugación analítica (Fig. 1B suplementaria). Tenía más del 99% de inmunorreactividad según lo juzgado por un ensayo de cambio de columna (figura complementaria 1C).

Biodistribución de111In-dota y125I-AVP04-07 en el modelo de xenoinjerto de ratón atímico LS-174T

125I-DOTA-AVP04-07 y111En DOTA-AVP04-07 tuvo un hiltura de sangre similares, con aproximadamente el 50% del radiolabel eliminado por 1 h después de la inyección y el 10% en circulación a las 4 h (Figs. 1a y 1b). La absorción de riñón fue alta (100 %ID/g a las 24 h) para111En el marcado pero no125Diabody con etiqueta I, demostrando que el riñón era la ruta principal de autorización. Para el111Diabody en el marcado hubo una absorción de tumor significativa, con más del 25 %de ID/G observada hasta 4 h después de la inyección y más del 20 %de ID/g retenida a las 48 h. La relación tumor-sangre para111In-AVP04-07 fue más de 50: 1 a las 24 h.125AVP04-07 marcado con I dio absorciones tumorales de 17 y 10 %de identificación/g a 4 y 48 h, respectivamente.

Síntesis y biodistribución de DOTA-CYS-VS-PEG3400-AVP04-07

Dado que la PEGilación reduce la absorción de riñón de diabodos marcados con radiometal, primero conjugamos AVP04-07 a DOTA-CYS-VS-PEG3400-NHS como se describió anteriormente para un diátel anti-Cea (16). VS-PEG3400-NHS se conjugó con lisinas superficiales del diáfold (a través del éster activo), seguido de una reacción con DOTA-CYS (20). El análisis por dodecilsulfato de sodio y la electroforesis en gel de IEF indican un cambio esperado a PI inferior (IEF gel, Fig. 2a suplementaria, carril 5), así como un cambio a un mayor tamaño molecular aparente debido a la adición de PEG3400 (gel de dodecilsulfato de sodio, supermercado. Fig. 2B, carril 5). El conjugado estaba radiomarcado con111Incluido3, cromatografiado en Superdex 75, y comparado con AVP04-07 no conjugado (figuras complementarias 2a y 2b). El peso molecular aparente del derivado PEG3400 fue de 105 kDa, versus 52.5 kDa. El aumento se puede atribuir al efecto de la PEGilación en el radio de Stokes y es similar al cambio de tamaño que observamos para el diáfold de ce-cea derivado de PEG3400 (16).

La biodistribución de111In-avp04-07-PEG3400 se muestra enFigura 1C. La absorción de riñón fue del 98 %de ID/g a las 24 h para Diabody no pegilado (Fig. 1A) y 8.4 %ID/g a las 24 h para Pegegilated DiaBody (Fig. 1C). La gran reducción de la absorción de riñón con PEGilación fue acompañada por un aumento en la absorción del tumor de 22 a 46 %de ID/g a las 24 hy una reducción en la relación tumor-sangre (> 46: 1 a 2: 1 a las 24 h) . El aumento en la retención tumoral se debe evidentemente a la eliminación de sangre prolongada de la diámbano de peegilado (t1/2β, 36 h) versus diáfolio no pegilado (t1/2β, 18 h). La reducción de la absorción de riñón fue mucho mayor de lo que se observó anteriormente con111In-Dota-Cys-VS-PEG3400 anti-Cea Diabody (16). Las posibles explicaciones para las diferencias observadas se discutirán más adelante.

Síntesis y biodistribución de PEG27 AVP04-07 monodispersado

Aunque la conjugación de AVP04-07 a un resto PEG3400 logró una absorción de riñón reducida, PEG3400 tendría inconvenientes importantes como un producto clínico debido a su polidispersidad inherente y la consiguiente incapacidad para fabricar productos que son fáciles de caracterizar químicamente. Varios bloques de construcción de PEG monodispersados ​​están disponibles comercialmente que se pueden convertir en reactivos heterobifuncionales utilizando la metodología de síntesis de péptidos. Por lo tanto, primero sintetizamos un derivado DOTA-PEG27-CYS-VS como se resume en el esquema suplementario 1. Enjungamos DOTA-PEG27-CYS-VS a las lisinas superficiales de la diátamos a pH 9.0 a una relación molar de 50: 1 ((22). Cuando el conjugado se caracterizó por la electroforesis en gel de dodecilsulfato de IEF y sodio (Fig. 2 suplementaria), se observaron los cambios esperados en PI y tamaño molecular. Él111En (Figura 2, traza verde) y125Los productos radiomarcados se purificaron en Superdex 75, el pico principal recolectado y los estudios de biodistribución realizados. La inspección del cromatograma y la comparación con el diáfolio no pegilado revela un cambio en el tamaño molecular aparente.

Los resultados de biodistribución se muestran enFiguras 3A y 3B. A pesar del menor peso molecular de la derivada PEG27 que del derivado PEG3400, se obtuvieron resultados casi equivalentes (compare conFig. 1C). A las 24 h, absorción de riñón de111El conjugado en línea fue de 8.3 %ID/g, absorción del tumor 49 %ID/G y la relación tumor-sangre 4.2: 1. Dada la reducción alentadora de la absorción de riñón para el derivado PEG27, decidimos sintetizar y probar la derivada de PEG12 análoga.

Síntesis y biodistribución de PEG12 AVP04-07 monodispersado

Sintetizamos DOTA-PEG12-CYS-VS (Esquema suplementario 1) y lo conjugamos con AVP04-07 a pH 9.0 usando relaciones molares de 20: 1 y 50: 1. AVP04-07 no modificado y los 2 conjugados se analizaron por espectrometría de masas de nanospray de alta resolución para determinar sus grados de sustitución (Figs. 4a y 4c). El Diabody no modificado dio una serie de especies M/Z que, cuando se desconvolucionan, tenían una masa calculada de 26,869 (Fig. 4a), de acuerdo con el predicho por la secuencia de aminoácidos. Para la conjugación con DOTA-PEG12-CYS-VS en una relación molar de 20: 1, los picos desconvolucionados difieren entre sí por múltiplos de 1,225 unidades de masa (Fig. 4B), como se esperaba para la conjugación con DOTA-PEG12-CYS-VS. Las diferencias de masa son las mismas para la conjugación de la relación molar de 50: 1, pero se desplazan a un mayor grado de sustitución (Fig. 4C). Usando alturas máximas como estimación, calculamos un promedio de 1.7 clavijas por monómero para el conjugado 20: 1 y un promedio de 3.0 clavijas para el conjugado 50: 1. Cuando cada conjugado se probó etiquetado con111En (178 MBQ/mg), el conjugado 20: 1 dio una incorporación de 8.3% de Radiolabel y el 50: 1 dio una incorporación del 92%.

Datos de biodistribución para111Y en125DOTA-PEG12-CYS-VS-AVP04-07 marcado con I fueron similares a los de los derivados PEG3400 y PEG27 (Figs. 3C y 3D). En particular, la absorción del riñón fue inicialmente mayor (13.4 %ID/g) para el PEG12 que el conjugado PEG27, pero cayó a niveles más bajos (6.1 %ID/g) en 96 h, mientras que la absorción del tumor y la eliminación de sangre son casi idénticas para PEG12 y PEG27 conjugados.

Datos de biodistribución para111Y en125DOTA-PEG12-CYS-VS-AVP04-07 marcado con I fueron similares a los de los derivados PEG3400 y PEG27 (Figs. 3C y 3D). En particular, la absorción del riñón fue inicialmente mayor (13.4 %ID/g) para el PEG12 que el conjugado PEG27, pero cayó a niveles más bajos (6.1 %ID/g) en 96 h, mientras que la absorción del tumor y la eliminación de sangre son casi idénticas para PEG12 y PEG27 conjugados.

64CU PET de los conjugados DOTA-PEG de AVP04-07

Mascota de64AVP04-07 marcado con Cu (Fig. 5A) demostraron una absorción de tumores relativamente modesta y una alta absorción de riñón de más de 2 días para el diáfold no pegilado. Por el contrario, los conjugados PEG12 y PEG27 mostraron una absorción de riñón relativamente poca y una alta absorción de tumores tan pronto como 21–22 h (Figs. 5b y 5c). La absorción tumoral medida para PEG12 fue de 49 ± 3 %de ID/g a 46 h, con una relación tumor-sangre de (9 ± 4): 1. Estos resultados son similares a los de los111Conjugado en línea y sugiere que la elección de radiometal tiene poco efecto en la biodistribución, una observación que hicimos previamente para un diáfolio anti-Cea (16).

Características comparativas de imágenes de64Cu- y111AVP04-07 en el marcado y sus conjugados DOTA-PEG

Para comparar diferentes versiones pegiladas de AVP04-07 radiolabeled con cualquiera111En o64CU, examinamos 2 parámetros: absorción de tumor absoluto y tumores a no tinco utilizando un IFOM (23). Los datos de biodistribución también se reemplazaron en el mismo gráfico para comparaciones (Fig. 3 complementaria). Las versiones pegiladas superan a la diáfold no pegilada en términos de absorción tumoral absoluta y tumor-sangre para ambas para ambas111Y en64C. Las gráficas de IFOM presentadas en la Figura 4 complementaria predicen las mejores imágenes con el64Diaboda no diseñada con CU a las 10 h o el64Versión PEG12 marcada con Cu a las 20 h. Con111En, las imágenes son óptimas con el conjugado PEG12 a 30-40 h. Sin embargo, cuando el tejido de fondo es riñón, el diáfold no pegilado muestra un contraste negativo hasta las 50 h debido a la alta absorción renal y la retención de radiolabel. Todos los diabodiados de PEGilados tuvieron una calidad de imagen similar hasta las 50 h, con un ligero borde al conjugado PEG27 cuando se toman imágenes de 10-15 h para64CU y 20–30 h para111En.









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