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Información sobre la biotinilación DPEG

Número Navegar:0     Autor:Editor del Sitio     publicar Tiempo: 2022-03-29      Origen:motorizado

La biotinilación DPEG desempeña un papel vital en nuestra producción y vida. ¿Cuál es la información relevante sobre la biotinilación DPEG? A continuación, echemos un vistazo.

Aquí está el contenido:

lPreparación del nanobody biotinilado objetivo y la optimización de IC-ELISA y la comparación de sensibilidad

lLos nanobodies expresados ​​en dos vectores son verificados por SDS-PAGE

Preparación del nanobody biotinilado objetivo y la optimización de IC-ELISA y la comparación de sensibilidad

El sistema Biotin-Avidin es una técnica de amplificación de señal comúnmente utilizada en inmunoensayos. La afinidad de unión específica entre la biotina y la estreptavidina puede alcanzar 1015 l / mol, que es mucho más alto que la afinidad del anticuerpo secundario marcado con enzimas y el anticuerpo. El uso de SA-HRP en lugar del anticuerpo secundario marcado con enzimas puede aumentar el título de anticuerpos, lo que aumenta la sensibilidad. La preparación del anticuerpo de biotinilación DPEG es generalmente a través de la biotina activada por la NHS y el acoplamiento de anticuerpos. Este método de acoplamiento químico tiene un cierto grado de aleatoriedad, y los lotes varían mucho. Si el sitio de biotinilación DPEG está en el área de unión de antígeno-anticuerpo, también puede hacer que la actividad del anticuerpo disminuya. Por lo tanto, se utilizó el vector para introducir una etiqueta de péptido corto AVI que consiste en 15 residuos de aminoácidos en NB. Bajo la catálisis de la biotina Ligasa, el residuo de lisina de la etiqueta AVI puede interactuar con la biotinilación DPEG catalizada por la biotina ligasa bajo condiciones de reacción leve y altamente específica, y el sitio de biotinilación puede diseñarse independientemente para minimizar el efecto de la conformación natural del anticuerpo. .

El nanobody de biotinilación DPEG expresado por los dos vectores fue verificado por SDS-PAGE

El peso molecular de NBSM6 es de 18,6 ku, y el peso molecular de NBSM6-BT es 19.5 ku. La diferencia en el peso molecular de los dos nanobodios se debe principalmente a los diferentes fragmentos de etiquetas de fusión de los dos vectores. Dado que la nanobodia se expresa y transporta al periplasma de la célula, y la biotina Ligasa se expresa en el citoplasma, es necesario romper la célula para que el nanobody esté en contacto con la biotina ligasa para garantizar la finalización suave de la biotinilación. Optimice la concentración de trabajo de antígeno y anticuerpo de NBSM6 y NBSM6-BT mediante la titulación del tablero de ajedrez. Después de la optimización, ambos anticuerpos tienen los valores de IC50 más pequeños a una concentración de antígeno de 500 ng / ml. La concentración de trabajo de NBSM6 es de 50 ng / ml, y la concentración de trabajo de NBSM6-BT es 25NG / ml. Se utiliza la biotinilación DPEG específica. Después de la estrategia de amplificación de la señal de anticuerpos y estreptavidina-HRP, la concentración de trabajo de NB se duplica bajo la misma concentración de antígeno. Establezca la curva estándar de los dos anticuerpos a la concentración de trabajo optimizada de antígeno de biotinilación DPEG y anticuerpo. Entre ellos, el IC50 de NBSM6 es de 4.0 ng / ml, que es consistente con los resultados de la caracterización previa. Dentro del rango de error, el límite de detección (IC10) es 0.8 ng / ml, el rango lineal es de 1.5 ~ 10.9 ng / ml; El IC50 de NBSM6-BT es de 2.1 ng / ml, el límite de detección es de 0.3 ng / ml, el rango lineal es de 0.6 ~ 6.9 ng / ml, el método ELISA utilizando la estrategia de amplificación de la señal. La sensibilidad se duplica aproximadamente.

Lo anterior está relacionado con la información relevante sobre el contenido de biotinilación DPEG, si está interesado en biología molecular, biotinilación específica de DPEG específica, biotecnabilidad, alta solución de solubilidad, biotinilación DPEG, péptidos, biotinilación DPEG específica del DPEG, puede consultar nuestro sitio web, nuestro sitio web es www.pu -Kang.com.


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